生物熒光分析濾光片

2024-08-15 派大星

生物熒光分析濾光片


在熒光光譜中,來自寬帶光源或激光的光入射到樣品上,然后樣品可能會(huì)發(fā)出微弱的熒光信號(hào)。熒光濾光片組通常由激發(fā)濾光片、二向色鏡(二向分光鏡)和發(fā)射濾光片組成,它們組合在一個(gè)濾光片立方體中。激發(fā)濾光片用于確保只有所需波長(zhǎng)入射到樣品上,而發(fā)射濾光片用于傳遞熒光信號(hào)并拒絕激發(fā)光和任何不需要的光。二向色鏡通常以 45° 的入射角使用,以將激發(fā)光反射到樣品并將發(fā)射信號(hào)傳輸?shù)綑z測(cè)器。激發(fā)、發(fā)射和二向色濾光片通常成組使用,以最大化所需信號(hào)并最小化任何不需要的信號(hào)。

 熒光顯微鏡原理

(熒光顯微鏡原理)

生物熒光分析常用的就是熒光光譜法分析,常用于共聚焦光路和流式細(xì)胞術(shù)中。

共聚光路原理圖

(共聚光路)

流式細(xì)胞分析的光學(xué)系統(tǒng)

光學(xué)系統(tǒng)由激光器和若干組透鏡、濾光片及小孔組成,它們分別將不同波長(zhǎng)的熒光信號(hào)送入到不同的電子探測(cè)器。其主要光學(xué)元件是分色反射鏡(DL)和濾光片(filter)。分色反射鏡(488DL、550DL、600DL、640DL)用于選擇被測(cè)熒光波長(zhǎng),只允許大于特定波長(zhǎng)的光通過,而將小于特定波長(zhǎng)的光反射到光電檢測(cè)器(長(zhǎng)波通特性)。濾光片一般分為三類:長(zhǎng)通濾片(long pass filter,LP)、短通濾片(short pass filter,SP)和帶通濾片(band pass filter,BP)。

例如,F(xiàn)ITC染料發(fā)射出525?nm的綠色熒光,PE染料發(fā)射出575?nm的橙色熒光,分別選擇550DL和525BP組成的濾片組和600DL和575BP濾片組,即可達(dá)到特異地接收FITC和PE熒光信號(hào)的目的。光電倍增管和硅光電二極管,可分別將側(cè)向散射光和前向散射光以及525~675等不同的熒光信號(hào)收集檢測(cè)。

 流式細(xì)胞儀原理圖

(流式細(xì)胞儀原理圖)


原理描述:?jiǎn)渭?xì)胞液流經(jīng)過細(xì)胞室,激光照射細(xì)胞(或微粒),細(xì)胞或微粒上承載的熒光抗體被激發(fā)后發(fā)出特定波長(zhǎng)的熒光,并分別通過不同濾光片,檢測(cè)器收集不同波長(zhǎng)的熒光信號(hào),經(jīng)計(jì)算機(jī)分析處理,將各通道的數(shù)字轉(zhuǎn)換為圖形顯示出來。

濾光片

 

熒光濾光片參考

熒光濾光片(單波段帶通)
通帶(nm)工作波段(nm)
BP377帶通濾光片352 - 402200 — 700
BP475457.5-492.5200—1000
BP559542 - 576200—1000
BP434425.5-442.5200—1000
BP469
451.5-486.5200—1000
BP497489 - 505200—1000
BP531511 - 551200—1000
BP628
608 - 648200—1000
BP655635 - 675200—1000


發(fā)射熒光片(單波段帶通)通帶(nm)工作波段(nm)
BP532505.5 - 544.5200 - 740
BP479459 - 499200 - 770
BP530
508.5 - 551.5200 - 800
BP535524 - 546200 - 800
BP447417 - 477200 - 1000
BP593
573 - 613400 - 925
BP692672 - 712400 - 925
BP716696 - 736400 - 925
BP630595 - 664515 - 800

 

二向色鏡(長(zhǎng)波熒光)通帶范圍(nm)反射范圍(nm)
DMLP409415 - 570327 - 404
DMLP452
460 - 610423 - 445
DMLP497505 - 800452 - 490
DMLP499508 - 675470 - 490
DMLP516520 - 700490 - 510
DMLP562569 - 730490 - 555
DMLP582595 - 800533 - 580
DMLP660669 - 726594 - 651
DMLP685695 - 810600 - 676


標(biāo)簽: 熒光分析濾光片